Фармакокинетика и Фармакодинамика ГР (В общем иследование на людях_

Прикольно, а их калькулятор насчитал 1000 руб.

 

не плати пока, я переведу, не срочно.

 

Клинические исследования

Фармакокинетика и фармакодинамика GH: зависимость от способа и дозы введения.


Alexandra Keller, Zida Wu1, Juergen Kratzsch2, Eberhard Keller, Werner F Blum3, Astrid Kniess4, Rainer Preiss5, Jens Teichert5, Christian J Strasburger1 and Martin Bidlingmaier6

Больница для детей и подростков, Университет Лейпцига, Oststr. 21-25, D-04317 Leipzig, Germany, первое отделение клинической эндокринологии, Медицинский факультет, Университет Медицины, 10117 Берлин, Германия, Институт лабораторной медицины, клинической химии и молекулярной диагностики, Университет Лейпцига, 61350 Лейпциг, Германия , Eli Lilly & Co., Бад-Хомбург, Германия и детская больница, университет Гиссен, 01731 Гиссен, Германия, Институт антидопингового анализа и спортивной биохимии, 04107 Kreischa, Германия, Институт клинической фармакологии, Лейпцигский университет, Лейпциг, Германия

Hospital for Children and Adolescents, University of Leipzig, Oststr. 21-25, D-04317 Leipzig, Germany, 1Division of Clinical Endocrinology, Department of Medicine, Charite´ University-Medicine, 10117 Berlin, Germany, 2Institute of Laboratory Medicine, Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, University of Leipzig, 61350 Leipzig, Germany, 3Eli Lilly & Co., Bad Homburg, Germany and Children’s Hospital, University of Giessen, 01731 Giessen, Germany, 4Institute of Doping Analysis and Sports Biochemistry, 04107 Kreischa, Germany, 5Institute of Clinical Pharmacology, University of Leipzig, Отдел внутренней медицины, университета Людвига Максимилиана в Мюнхене, 80336 Мюнхен, Германия.
(по любым вопросам обращаться: alexandra.keller@medizin.uni-leipzig.de)

Тема исследования
Тема: Фармакокинетические и фармакодинамические данные после инъекций рекомбинантного (полученного в лаборатории с помощью генной инженерии) человеческого гормона роста (rhGH) у взрослых достаточно редки, но необходимы в деле исследований заместительной гормональной терапии, а также при выявлении случаев допинга у спортсменов. Мы исследовали фармакокинетику, фармакодинамику и изменения показателя 20 kDa GH после инъекций rhGH в разных дозах и способах инъекций.

Вид: Открытое перекрестное исследование с использованием отдельных болюсов rhGH.

Методы: Здоровые, физически тренированные взрослые (10 мужчин, 10 женщин) получали инъекции болюсов rhGH в трех видах: 0.033 мг/кг подкожно, 0.083 мг/кг подкожно, и 0.033 мг/кг внутримышечно. Концентрация 22 и 20 kDa GH, IGF-I, и (IGFBP)-3 измерялась повторно до и в течение 36 часов после инъекции.

Результаты: Максимальная концентрация сыворотки GH (Cmax) и площадь под кривой временной концентрации (AUC) были выше после внутримышечного, чем после подкожного введения дозы 0.033 мг/кг (Cmax 35.5 и 12.0 мг/л; AUC 196.2 и 123.8). Показатели Cmax и AUC были выше у мужчин, чем у женщин (P!0.01), также как и фармакодинамические изменения были более выраженными. Концентрация IGFBP-3 не показала никакой зависимости от дозы. В ответ на введение rhGH, показатель 20 kDa GH снижался у женщин, и оставался подавленным в течение 14-18 ч (низкая доза) и 30 ч (высокая доза). У мужчин значение показателя 20 kDa GH было ниже выявляемого в начале и в течение всего исследования.

Выводы: После введения доз rhGH, фармакокинетические параметры в основном зависят от способа инъекций, тогда как фармакодинамические переменные и концентрация 20 kDa GH зависят главным образом от пола испытуемого. Эти различия должны быть рассмотрены при терапевтическом применении гормона роста, а также при выявлении случаев допинга rhGH.


Европейский журнал эндокринологии 156 647–653




Введение в исследование
У взрослых пациентов с недостатком гормона роста (GH) подкожное введение фиксированной дозы рекомбинантного гормона роста (rhGH) имеет более выраженный эффект у мужчин, чем у женщин. Это, как полагают, происходит частично из-за выработки женским организмом печеночного инсулиноподобного фактора роста, провоцируемой эстрогенами, в том числе полученными извне. Кроме того, мужские и женские модели распределения жира существенно различаются и потенциально могут быть связаны с различиями во всасывании rhGH в месте инъекции. В ранних исследованиях rhGH использовался внутримышечный способ введения инъекций, из-за чего не было замечено половых различий, но в них участвовали и группы детей с пока не развитыми половыми различиями в силу возраста. Способ введения был изменен на используемые сейчас подкожные инъекции. Были замечены различия в характеристиках всасывания между этим двумя способами введения препарата. У детей наблюдались фармакокинетические данные на ранних стадиях, тогда как у взрослых пациентов они были редки.

К сожалению, участились злоупотребления rhGH, особенно у спортсменов, и методы, способные выявить такие злоупотребления, достаточно ограничены. Введенный извне rhGH структурно идентичен вырабатываемому организмом 22 kDa GH, который является изоформой, секретируемой человеком. Наиболее часто используемые GH иммунологические анализы признают идентичными изоформы 22 kDa GH и 20 kDa GH, которые возникают в результате альтернативного сплайсинга. Было высказано мнение о том, что развитие иммуноанализа, которые помогут дифференцировать изоформы, может быть использовано для оценки злоупотребления гормоном роста.


Данное исследование было разработано для изучения фармакокинетики и фармакодинамики rhGH у взрослых после однократной инъекции внутримышечным и подкожным путем и для оценки различий действия гормона роста на мужчин и женщин. Фармакокинетика изоформы 22 kDa была определена и фармакодинамика оценена в результате изменения концентрации сыворотки кДа изоформы 20, IGF-I и (IGFBP) -3.


Объекты и методы исследования
Объекты
Были отобраны десять мужчин и десять женщин, исходя из их состояния физического здоровья и уровня спортивной подготовки. Критериями являлись: возраст 18-35 лет, индекс массы тела (BMI) 19–27 кг/м2, наличие регулярных физических занятий по крайней мере три раза в неделю, и постоянное употребление оральных контрацептивов у женщин. Были исключены пациенты с какими-либо хроническими заболеваниями, принимавшие медикаменты, влияющие на работу эндокринной системы, и принимавшие когда-либо раньше гормон роста. Перед началом исследования было проведено полное физическое обследование, анализы на биохимию крови, глюкозу и ферментацию печени. Протокол одобрили местные комитеты по этике Университета Лейпцига, Германия. Все пациенты дали письменное информированное согласие и исследование было проведено в соответствии с принципами Хельсинкской декларации и основных принципов надлежащей клинической практики.


Форма исследования
Исследование имело рандомную вариативную форму. Пациенты участвовали в клинических исследованиях в течение трех периодов, каждый из которых начинался в 6 утра натощак.

Им вставлялись внутривенные катетеры в переднюю локтевую вену, и отбирались образцы крови 60 и 0 мин (исходный уровень) до введения rhGH, а затем с 2-часовым интервалом в течение следующих 36 часов. В первый раз rhGH вводили в виде болюса в объеме 0,033 мг/кг массы тела, подкожно 0,083 мг/кг или 0,033 мг/кг внутримышечно, в соответствии с заранее определенной случайно выбранной схемой. В течение трех периодов исследования, каждый пациент получал каждую из трех доз rhGH в случайном порядке; пациенты оставались в неведении относительно введенной дозы. Периоды исследования были разделены на 4 недели для синхронизации с менструальным циклом у женщин.


Измерения гормонов
Концентрацию сывороточного GH анализировали с помощью двух объединенных иммуноанализов. В анализе 1 (MAB 3B4 / биотинилированный мАт 10À7) использовали комплекс антител, который предпочтительно распознаёт мономерный 22 kDa изоформы GH, который идентичен rhGH и нижний предел обнаружения составлял 0,1 мг/л. Коэффициенты вариации были 6,5 и 4,8% при концентрациях 0,8 и 6,2 мг/л соответственно. Межпробные коэффициенты вариации при тех же концентрациях 8,2 и 6,1% соответственно. Анализ 2 использовали для измерения изоформы 20 kDa GH с использованием двух моноклональных антител с не перекрестной реактивностью до 22 kDa, GH. Коэффициенты вариации были 5,4 и 7,5% в дозе 1 мг/л, предел количественного определения составлял 0,05 мг/л. Анализ 1 направлен на '22 kD GH 'в то время как Анализ 2 направлен на '20 kD GH'. Сыворотку IGF-I измеряли с помощью автоматизированного хемилюминесцентного иммуноанализа (Nichols Advantage IGF-I, Nichols Институт диагностики, Сан-Хуан Капри трано, CA, USA) с использованием подкисления и IGF-II избыток для устранения помех от БСИФР. Сыворотка БСИФР-3 анализировали с помощью RIA, описанной ранее. Все образцы сыворотки хранили при 8С до проведения анализа.


Расчет фармакокинетических и фармакодинамических параметров

Фармакокинетические параметры оценивались с помощью стандартных анализов с использованием программного обеспечения Win-NONLIN pharamacokinetic версии 4.01 (Phar- sight Corp., Mountain View, CA, (США).

Площадь под временной кривой концентрации (AUClast) была определена как площадь под кривой от времени дозирования до последней измеряемой концентрации, рассчитанной с использованием линейного правила трапеции. AUCinf рассчитывали путем экстраполяции к бесконечности с помощью терминала полувыведения (t1 / 2Z) оценивается с логлинейной регрессии (AUCZ AUClastCAUCinf). Среднее время пребывания (MRT) было оценено как площадь под кривой первого момента (AUMC), деленное на ППК. Видимый плазменный клиренс (CL/F), был определен как отношение введенной дозы и AUC, видимый объем распределения (Vz / F) был рассчитан как (CL / F) / LZ.

Вместо полной ППК, повышение IGF-I или IGFBP-3 выше базового уровня был использован для вычисления параметра DAUC 0-36.


Статистические методы
Данные приведены в виде среднего значения GS.D. или как медиана и межквартильный диапазон (Q1, Q3). Концентрация GH ниже предела обнаружения анализов, была назначена 0 мг/л. Сравнения между полами, дозировками и способами введения проводили с помощью теста Вилкоксона или непарного теста U-Манна-Уитни. Корреляция рангов Спирмена с вероятностью двух значений использовалась для проверки связи между переменными. Статистическая значимость была принята для P! 0.05. Все статистические расчеты были выполнены с Excel версии 8.0 и SPSS версия 11.0 для Windows (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США).

Результаты
Исходные характеристики
Исходные характеристики испытуемых приведены в таблице 1. Оба уровня 22 и 20 kDa GH изначально были у женщин значительно выше, чем у мужчин. В противоположность этому, уровни IGF-I в сыворотке базовой линии были значительно ниже у женщин, чем у мужчин. Различия между женщинами изучаемых в фолликулярной фазе и в лютеиновой фазе не были значимыми (данные не показаны).

Таблица 1.Исходные характеристики испытуемых.




Фармакокинетика
Рисунок 1 иллюстрирует концентрацию в сыворотке 22 kDa GH с течением времени у мужчин и женщин дозы rhGH и метода введения. Фармакокинетические параметры (таблица 2) не коррелировали с возрастом или ИМТ в любой дозе и способе введения.








Рисунок 1. Временной ход 22 K GH (A) IGF-I(B) и IGFBP-3 (С) после болюсной инъекции rhGH (показано стрелкой) в различных дозах и способах введения у женщин и мужчин. Индивидуальные результаты объединены в общую медиану группы (черная линия).




Таблица 2. Фармакокинетика роста гормона 22 kDa (GH) в зависимости от пола. Данные проранжированы по группе (усреднены).


С введением одной и той же дозы rhGH (0,033 мг/кг), наблюдались повышенные значения 22 kDa GH, максимальная концентрация (Сmax) и ППК при введении внутримышечно по сравнению с подкожным методом, у мужчин, но не у женщин. Этой разницы у Cmax и AUC не наблюдалось при введении подкожно, независимо от дозы. В противоположность, после внутримышечного введения значения Cmax и AUC были значительно выше у мужчин, чем у женщин, с одновременно более низким значением CL / F у мужчин. Значение MRT в группе низкой дозы был ниже у мужчин, чем у женщин, независимо от способа введения.


Фармакодинамика: результаты IGF-I и IGFBP-3
Рисунки 1B и C показывают концентрацию сыворотки IGF-I и IGFBP-3 у мужчин и женщин в зависимости от времени и способа введения. Пациенты с более высокими концентрациями исходных IGF-I показали больший отклик на rhGH, чем те, у которых наблюдалась более низкая исходная концентрация; эта зависимость выделена во всех трех периодах исследования.

Увеличение значений по сравнению с исходными с течением времени (DAUC 0-36) было выше с высокой дозой обеих сывороток. Существенной разницы уровня сывороток не наблюдалось при подкожном и внутримышечном способе введения, от одной и той же дозы rhGH. Максимальный уровень сыворотки IGF-I отличался у мужчин и женщин в группе с высокой дозой. IGF-I DAUC 0–36 показал четкое различие полов при низкой дозе, с более высокими значениями у мужчин по сравнению с женщинами; не зависимо от способа введения. При высокой дозе, разница между полами была статистически незначительной. IGFBP-3 DAUC 0-36 была значительно выше у мужчин, чем у женщин при низкой подкожной дозе, в то время как при высокой подкожной дозе наблюдались аналогичные значения (таблица 3).


Таблица 3. Фармакодинамика инсулиноподобного фактора роста-I (IGF-I) и IGFBP -3, различия данных в зависимости от пола. Значения приведены в виде средних значений по диапазону.




Фармакодинамика: 20 kDa GH
Исходно 20 kDa GH был обнаружен у всех женщин во всех трех периодах изучения; после инъекции rhGH происходило его быстрое подавление (рис. 2). У женщин средний уровень 20 kDa GH снизился с 0,4 в начале исследования до уровня ниже 0,2 мг/л в течение 2ч после инъекции rhGH. Длительность подавления 20 kDa GH у женщин зависела от дозы инъекции; возобновление секреции 20 kDa GH наблюдалось в группе с низкой дозой rhGH и подкожным введением через 26 часов, в группе с низкой дозой и внутримышечным введением через 28 часов, а в группе с высокой дозой и подкожным введением через 34 часа. В противоположность этому у мужчин уровень 20 kDa GH был близок или меньше нижнего предела количественного определения (0,05 мг/л), на исходном уровне и в течение всего периода наблюдений.



Обсуждение результатов
Данные исследования свидетельствуют о том, что пол, доза и способ введения напрямую влияют на наличие и выработку rhGH у здоровых молодых людей. Значения фармакокинетических переменных зависят, главным образом, от способа инъекций, тогда как фармакодинамические значения зависят в первую очередь от пола испытуемых. Кроме того, подавление выработки 20 kDa GH после инъекции rhGH происходило только у женщин; у мужчин этот показатель был низок еще на исходном уровне.


В исследованиях принимали участие люди с физической подготовкой, но не профессиональные спортсмены, поскольку последние могут по-разному реагировать на инъекции гормона роста. При отсутствии инъекций rhGH было зарегистрировано снижение концентрации сывороточного IGF-I и IGFBP-3 во время интенсивных тренировок. Доза rhGH, используемая в данном исследовании, была супрафизиологической (высокой), поскольку можно предположить, что незаконное использование гормона роста спортсменами будет в высоких дозах.

Физиологическая замена гормона роста у взрослых пациентов с недостаточностью GH требует примерно от одной трети до одной пятой дозы, используемой в данном исследовании. Несмотря на высокие дозы в данном исследовании, мы наблюдали некоторые из побочных эффектов, ранее описанных у взрослых с дефицитом гормона роста. Была замечена высокая частота возникновения диареи, особенно после введения высокой дозы rhGH. Мы не нашли никаких объяснений ей в отношении диеты или желудочно-кишечных инфекций. Также предполагаем, что понос могли вызвать нарушения регуляции жидкости, вызванные высокой дозой.



Уровни Cmax и AUC были выше после внутримышечного введения, чем после подкожного в одинаковой дозе, что соответствует предыдущим данным, указывающим на более высокие показатели в течение меньшего времени при внутримышечном введении, по сравнению с подкожным. Также были найдены значительные различия в показателях между мужчинами и женщинами GH Cmax и AUC после внутримышечной, но не подкожной инъекции.


Рисунок 2 Концентрация в сыворотке крови 20 kDa GH после введения rhGH при трех различных дозировках; (A) мужчины, (В) женщины. Средние значения по межквартильному диапазону (Q1-Q3).




Можно было бы ожидать более высокий показатель t1/2Z после подкожной инъекции женщинам, из-за большего содержания подкожного жира. Но такие данные не получены, возможно, в силу того, что в исследовании принимали участие физически тренированные и подтянутые женщины. Увеличение IGF-I положительно коррелировало с исходными количественными данными, и не зависело от способа введения. По сравнению с IGFBP-3, увеличение количества сыворотки IGF-I было быстрее и более выраженным, в соответствии с предыдущими публикациями, указывающими на то, что соотношение IGF-I / IGFBP-3 увеличивается сразу после инъекции. Увеличение показателя IGFBP-3 проявлялось не сразу, не зависело напрямую от введенной дозы, и не возвращалось на исходный уровень исследования, что подтверждает, что IGF-I является более чувствительным маркером действия GH у тренированных взрослых, чем IGFBP-3.

Увеличение IGF-I, но не увеличение IGFBP- 3 показывает заметные половые различия. Общее увеличение IGF-I поле инъекции гормона роста было значительно выше у мужчин, чем у женщин, в то время как показатели Tmax и Cmax не отличались у мужчин и женщин. Изменения показателей IGF-I и IGFBP3 в целом выше у мужчин при меньшей дозе. Тем не менее, может быть и так, что высокая доза rhGH, будучи более сильным стимулом, также вызывает более сильную реакцию у женщин. Разница реакции между женскими и мужскими организмами, скорее всего, из-за влияния эстрогенов, так как все женщины в исследовании принимали оральные контрацептивны. Не было замечено четких различий в изменении IGF-I, но это исследование не было специально разработано для изучения влияния эстрогенов. Было высказано предположение, что применение оральных эстрогенов препятствует выработке печеночного IGF-I, однако женщины, не принимающие эстрогены дополнительно, также демонстрируют более низкую реакцию IGF-I, чем мужчины (1).

Исследования на животных показывают, что сложные механизмы, в том числе изменение выработки печеночного рецептора гормона роста, приводят к половым различиям в значениях гормона роста (соматотропной оси). В отличие от концентрации сыворотки GH, концентрации IGF-I и IGFBP-3 не вернулись к первоначальным значениям в течение периода наблюдения, что поддерживает идею использования этих маркеров для выявления допинга гормоном роста.

Существующие исследования взаимосвязей между изоформами 22 kDa и 20 kDa позволяют предположить, что их секреция является частью постоянного уровня GH. Поэтому нижний уровень 20 kDa и его долгосрочное подавление у мужчин, предположительно является следствием более низкой общей концентрации GH. Изоформы 20 kDa GH также подавляются у женщин после введения rhGH, в соответствии с отрицательной обратной связью экзогенного rhGH и секреции гипофизарного гормона роста; длительность подавления зависела от дозы и повторное появление 20 kDa было замечено через 26-28 часов после низких доз rhGH и через 34 часа после высокой дозы rhGH. Эти растянутые по времени изменения являются еще одним доказательством того, что значения изоформ гормона роста могут быть использованы для обнаружения инъекции введение rhGH у женщин. С помощью метода анализа, используемого в этом исследовании, уровень 20 kDa GH у мужчин были почти невозможно обнаружить, что делает невозможным продемонстрировать дальнейшее подавление. Таким образом, необходимы более чувствительные тесты с целью определения количества 20 kDa GH.


Таким образом, наши данные показывают, что у здоровых физически тренированных взрослых отзывчивость на способ инъекций гормона роста регулируется целым рядом факторов. Фармакокинетические параметры, в основном, зависят от способа введения (более высокий уровень GH Cmax и AUC после внутримышечной инъекции), в то время как фармакодинамические параметры определяются в основном по половому признаку.

Эти различия необходимо учитывать при принятии решений в отношении терапевтического дозирования rhGH. Изменения в выработке молекулярных изоформ после инъекции rhGH показывают, что у женщин уровень показателя 20 kDa GH может быть полезным параметром при обнаружении допинга гормоном роста.



Благодарности
Мы благодарим, кто принимал участие в исследовании за их всестороннее сотрудничество. Кроме того, мы благодарим медсестер и сопровождающих лиц научно-исследовательского отдела эндокринологии больницы для детей и подростков Университета Лейпцига, Германия. Кроме того, мы благодарим доктора Гоца Гелбриша (Центр координации клинических исследований, Университет Лейпцига, Германия) за поддержку в области управления данными. Это исследование было поддержано Национальным институтом спортивных исследований (BISP), Бонн, Германия и компанией Eli Lilly, Бад-Хомбург, Германия.

 

Запакую все в пдф и кину в раздел ФАЙЛЫ на сайт, что бы всегда можно было скачать. Отличная работа, сейчас все прочту

 

Кажется у меня голова заболела. Я понял что факторов пиздец дохуяя.